confirmatie experiment
Op zoek naar bacteriën die wortelknolletjes vormen
Per tuintje werden 5 planten in het labo verder geanalyseerd op de aanwezigheid van knolletjes op het wortelstelsel. Bacteriën werden uit de gevonden wortelknolletjes gehaald in het labo van prof. Anne Willems (zie Analyse van de wortelknolletjes) en in een volgende stap willen we nagaan welke bacteriën in staat zijn knolletjes te vormen. Daarom voegen we de aparte bacterie-soorten opnieuw toe aan een jonge sojaplant en kijken we na 4 weken of er zich opnieuw wortelknolletjes gevormd hebben.
In dit deel van het project is het belangrijk om het experiment uit te voeren met steriel materiaal in een gecontroleerde omgeving zodat enkel de bacterie de we toevoegen gelinkt kan worden aan de vorming van een wortelknolletje.
Opgroeien van de bacteriën
Om te beginnen moeten de te testen bacteriën opgegroeid worden in een vloeibare cultuur. Met behulp van een steriel staafje worden bacteriën overgebracht van een groeiplaat naar een buisje met 5 ml groeimedium. Als de bacteriën voldoende gegroeid zijn wordt het buisje overgegoten in een erlenmeyer dat 30 ml groeimedium bevat. Na 1 tot 2 dagen incubatie bij 28°C onder constant schudden, hebben de bacteriën een optimale densiteit bereikt.
Opgroeien en behandelen van de sojaplanten
Om er zeker van te zijn dat de bacteriën die we testen aan de basis liggen van de vorming van de wortelknolletjes, worden de sojabonen eerst gesteriliseerd en in steriele omstandigheden gekiemd voor 4 dagen in het donker (afgedekt met aluminiumfolie).
De boontjes die goed gekiemd zijn brengen we over naar potten met vermiculiet - een soort van steriele bodem. De planten worden een week gegroeid in de serre, vooraleer te behandelen met bacteriën.
Een verdunde oplossing van bacteriën wordt aangebracht ter hoogte van het begin van de wortel, en laten de sojaplanten 4 weken verder groeien.
Wortelknolletjes zoeken
Met de hulp van een microscoop wordt het wortelstelsel van de sojaplant in detail bekeken, op zoek naar wortelknolletjes.
Wanneer we een wortelknolletje vinden, weten we dat de bacterie waarmee de plant werd behandeld - een bacterie afkomstig uit één van de tuinen - in staat is een wortelknolletje te vormen en dus een goede kandidaat is voor verder onderzoek in bv. veldproeven.
